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糊精瓊脂糖凝膠FF的實(shí)驗(yàn)原理

糊精瓊脂糖凝膠FF是一種將糊精鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì)，該產(chǎn)品保留了瓊脂糖極-好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，與生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高，非特異性吸附少，流速快等特點(diǎn)。得益于糊精與麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）的高度特異性，通過(guò)一步糊精瓊脂糖凝膠FF層析就可以獲得非常高純度的MBP，因此本產(chǎn)品主要用于麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）、與麥芽糖結(jié)合蛋白融合的重組蛋白（MBPtag）的分離純化。

品  名：糊精瓊脂糖凝膠FF

英文名：Dextrin NUPharose Fast Flow, Dextrin NUPharose FF

規(guī)  格：20 ml，100 ml，1 L，1 ml預(yù)裝柱

運(yùn)  輸：2 ~ 30℃，常壓、避光

貯  存：20%乙醇，2 ~ 8℃

使用方法：

1. 裝柱

1.1 根據(jù)分離目標(biāo)性質(zhì)配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

1.2 將凝膠抽干，并用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇，用蒸餾水配成勻漿并脫氣。

1.3 將層析柱垂直固定，底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一段液位。

1.4 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降。

1.5 連結(jié)好柱子頂端活動(dòng)柱頭，打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)操作流速流過(guò)5柱體積，再使用1.5倍的操作流速流過(guò)5柱體積，調(diào)節(jié)適配柱頭，使其盡量貼近膠面，最后用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

注意：（1）所有操作過(guò)程不能引入氣泡，保證裝膠的均勻度。（3）如無(wú)條件做1.2，填料層有氣泡，可進(jìn)行2次裝柱，去除保存的乙醇和氣泡。（4）乙醇等試劑配制的溶液需要脫氣。

2. 平衡

將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變。推薦的結(jié)合平衡緩沖液為：20mM Tris-HCl, 200mM NaCl, 1mM EDTA, pH 7.4。

3. 上樣

切換轉(zhuǎn)換閥進(jìn)行上樣，上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，也可進(jìn)行線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)找到最佳上樣量；樣品的預(yù)處理：置換緩沖液，澄清過(guò)濾（0.45、0.22μm）等。

4. 沖洗

用2-3個(gè)柱體積的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變，此時(shí)未交換的組分被清洗出去。

5. 洗脫

一般推薦用10mM麥芽糖（可含緩沖成分）進(jìn)行洗脫。推薦的洗脫緩沖液為：20mM Tris-HCl, 200mM NaCl, 10mM 麥芽糖, 1mM EDTA, pH 7.4。

6. 再生

以100cm/h的流速，用蒸餾水清洗3-5個(gè)柱體積，然后用0.5mol/LNaOH清洗3-5個(gè)柱體積，接著再蒸餾水清洗3-5個(gè)柱體積。然后根據(jù)需要用結(jié)合緩沖液平衡進(jìn)行下一次純化或用20%乙醇清洗3-5個(gè)柱體積進(jìn)行保存。