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南京信帆生物:糖芯片分析實驗指導
更新時間:2016-04-22   點擊次數(shù):1738次

生物通報道:細胞表面的由脂質(zhì)和蛋白組成的糖體分子蘊藏著許多奧秘,決定了細胞如何發(fā)育,如何相互作用以及溝通。細菌和病毒也就是粘附在這些線性或帶分枝寡糖(glycan)上感染細胞的,免疫系統(tǒng)要進行反擊,也需要首先學會識別微生物上的糖殼,展開先天和后天的防御。

經(jīng)過多年的探索,科學家們已經(jīng)掌握了不少糖體分子的基本生物學特征,但是比較于DNA和蛋白,我們對于這些分子的了解還遠遠不夠,然而由于糖體結(jié)構(gòu)復(fù)雜,要想構(gòu)建出這種分子非常困難,而且與DNA不同,糖體幾乎是不可能克隆和擴增的,因此數(shù)量也是有限。

近年來一種用于分析遺傳物質(zhì)的新技術(shù)被證明適用于糖生物學,這就是芯片技術(shù)。*個糖芯片誕生于2002年,也就是在芯片技術(shù)問世后,用于研究基因表達后的第7個年頭。

糖芯片由少量多種類的天然或合成的低聚糖組成,研究人員利用這種芯片能識別結(jié)合在糖上的蛋白,細胞和微生物。由于芯片制作只需要極少量的糖分子,因此這種技術(shù)得以能進行蛋白糖親和性的廣泛篩選。

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目前有十幾個實驗室構(gòu)建自己的糖芯片,隨著更多的糖分子被分離和合成出來,這些芯片將會不斷完善。目前制造生物試劑zui大及zui多糖芯片的是一個性的研究協(xié)會:功能糖組學協(xié)會(Consortium for Functional Glycomics,CFG,生物通譯),以及英國倫敦帝國學院的糖科學實驗室,其它一些實驗室則主要是針對自己的實驗項目進行小規(guī)模的制作。

“在這一點上我認為沒有什么單個平臺的贏家”美國國家癌癥研究所化學糖生物學組組長Jeffrey Gildersleeve說。

由于RNA測序價格下降,DNA芯片已不再像以前那樣受到矚目,但糖芯片的未來卻被看好,“我認為未來五年里,(糖芯片)就會開始商業(yè)化,進入工業(yè)應(yīng)用和應(yīng)用領(lǐng)域,”埃默里大學醫(yī)學院功能糖組學國家中心(NCFG,生物通譯)主任Richard Cummings說。

糖芯片制備原理

糖芯片的制備原理與基因芯片,蛋白芯片相似,是將多種微量的糖類化合物以點陣的形式固定在某種材料制作的底片上,采用高通量掃描技術(shù)和熒光染色等手段分析和檢測糖分子與其它生物大分子之間的特異性結(jié)合,進而研究其生物功能和作用機制。

糖芯片具有檢測樣品用量少,特異性高,高敏感性,高通量和穩(wěn)定性等優(yōu)點,的提高了糖化學研究的效率,這種芯片可以分成單糖或二糖芯片,寡糖芯片,多糖芯片和復(fù)合式芯片,另外根據(jù)用途不同也可以分成功能糖組學芯片,藥物開發(fā)糖體芯片和糖抗原免疫診斷芯片等。

制備糖芯片的方法有非化學修飾糖類固定和化學修飾糖類固定,前者通過點樣儀點樣將糖直接固定在玻片上,屬于非特異性結(jié)合,這種方法無需對糖基進行修飾。但是由于糖類化合物的性質(zhì),如分子量,空間結(jié)構(gòu),溶解性,反應(yīng)位點等都不同,因此有些糖類化合物無法直接以非共價結(jié)合的方式直接固定在固體介質(zhì)上,為此科學家們就需要對糖進行化學修飾,即嫁接上能與載體表明產(chǎn)生特異性結(jié)合的基團,然后再固定。

糖芯片與其它技術(shù)的結(jié)合

糖芯片將糖分子通過共價或非共價作用固定于經(jīng)化學修飾的基質(zhì)上, 進而對糖蛋白等待測樣品或糖分子探針本身進行測試、分析。與芯片上糖探針存在特異作用的樣品分子被吸附, 其他無特異作用的分子則在清洗液的沖洗下被洗掉。通過熒光染色等檢測方法可以簡單、快速地篩選出存在特異作用的分子,從而在分析糖蛋白結(jié)構(gòu)和功能等方面起到重要作用。

質(zhì)譜技術(shù)是目前糖生物學家應(yīng)用的測定糖鏈結(jié)構(gòu)的工具??煸愚Z擊質(zhì)譜(FAB-MS)、 電噴霧質(zhì)譜(ES-MS)、基質(zhì)輔助激光解析離子化飛行質(zhì)譜是在糖鏈結(jié)構(gòu)測定方面應(yīng)用廣泛的3種質(zhì)譜,它們可以直接對樣品進行離子化和解析作用以獲得信息, 而且可以完整的糖復(fù)合物或片段化的樣品進行分析。

在利用糖芯片的同時, 可以聯(lián)合利用質(zhì)譜技術(shù), 來分析糖蛋白等待測樣品或糖分子探針的具體結(jié)構(gòu)。例如, 利用DNA芯片點樣儀將糖抗原點印在化學修飾的玻片上。然后把芯片與待測樣品溫浴, 此時, 待測樣品中的配體就會與芯片上的糖分子結(jié)合, 而后用類 似于蛋白質(zhì)芯片中所用的免疫檢測技術(shù)進行染色分析, 如用抗體 ( 單抗或多抗血清 )或其他糖結(jié)合蛋白 (凝集素、 細胞因子等 )進行免疫染色。經(jīng)抗體染色的玻片可以用生物芯片掃描儀檢測熒光信號, 并借助于計算機進行數(shù)據(jù)處理和分析, 得出有效的熒光信號。zui后, 在有效熒光信號所 對應(yīng)糖芯片的原位進行質(zhì)譜分析, 分析其具體結(jié)構(gòu)。

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