腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒簡介
腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)是1982年Barde等首先在豬腦中發(fā)現(xiàn)的一種具有神經(jīng)營養(yǎng)作用的蛋白質。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及其受體在神經(jīng)系統(tǒng)廣泛表達。一種小分子二聚體蛋白質BDNF結構、分布及信號轉導BDNF分子單體是由119個氨基酸殘基組成的分泌型成熟多肽，蛋白等電點為9.99,相對分子質量為3.5×103,主要由β折疊和無規(guī)則卷曲二級結構組成，含有3個二硫鍵，為一種堿性蛋白質。BDNF分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、內分泌系統(tǒng)、骨和軟骨組織等廣泛區(qū)域內，但主要是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內表達，其中海馬和皮質的含量zui高。
腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒的顯色與比色
顯色
顯色是ELISA試驗中zui后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。適當提高溫度，有助于加速顯色。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。在定量檢測中，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。ELISA顯色結果通過酶標儀進行，可減少實驗誤差，提高臨界值樣本的分析準確度。盡量避免肉眼直接判斷結果，因為不同個體的視覺存在差異。應注意，加顯色劑時，要保持顯色劑不外流。加終止液時應避免產(chǎn)生較多氣泡，否則可能使假陽性結果的出現(xiàn)概率增加。
比色
比色的方法有目視法和酶標比色法2種。目視法簡單明了，但對同一標本，操作者的不同有時會出現(xiàn)不同的結果，具有一定的主觀性。比色的結果通常用光密度表達，現(xiàn)按規(guī)定用吸光度表達。酶標儀不應安置在陽光或強光照射下，操作時的適宜室溫在15℃~30℃之間，使用前要先預熱儀器15~30min，使測得結果更為準確。比色前，應先用潔凈的吸水紙擦拭干凈板底附著的液體，然后將板正確放在酶標比色儀的比色架上。綜上所述，的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。在實際應用過程中，操作者必須熟練掌握基本操作技能，對每個環(huán)節(jié)進行嚴格仔細的核查，盡量避免假陽性和假陰性反應的出現(xiàn)，保證檢測結果真實可靠，為診斷和疾病防治提供可靠的理論依據(jù)。
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