背景及目的
抑郁癥發(fā)病機(jī)制不清。結(jié)構(gòu)影像、遺傳、神經(jīng)生化的研究都從不同角度闡述了抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，種種證據(jù)也顯示抑郁癥的發(fā)病在腦代謝層面是有其器質(zhì)性基礎(chǔ)的，但至今還無明確、統(tǒng)一的結(jié)論。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)為抑郁癥發(fā)病機(jī)制的研究提供了新的手段。本研究通過建立抑郁癥的動物模型，利用雙向電泳和質(zhì)譜鑒定技術(shù)，分析海馬組織差異蛋白質(zhì)表達(dá)，旨在探索抑郁癥新的治療靶點(diǎn)，為建立客觀的診斷、治療、停藥指標(biāo)提供線索。
方法
以雄性成年SD大鼠10只，采用慢性不可預(yù)見的輕度應(yīng)激（chronicunp redictable mild stress，CUMS）制作抑郁癥模型。將動物予以夾尾1 min、禁水24 h、禁食24 h、45℃環(huán)境5 min、晝夜顛倒24 h、水平振蕩30 min （160次/min）、4℃冰水游泳5 min，7種刺激每天隨機(jī)采取1種，共安排3周。經(jīng)行為學(xué)測試：蔗糖水試驗(yàn)和曠野試驗(yàn)（open - field test）評估模型后，三氯乙酸/丙酮沉淀法提取海馬組織蛋白質(zhì)，以固相pH梯度雙向凝膠電泳分離蛋白質(zhì)，考馬斯亮藍(lán)染色后，應(yīng)用ImageMaster 2D軟件進(jìn)行圖像分析。胰蛋白酶膠內(nèi)消化，進(jìn)行MALD I -TOF-MS質(zhì)譜分析，將得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，去除主要干擾峰后，檢索NCBI數(shù)據(jù)庫，鑒定蛋白質(zhì)。
結(jié)果
10只大鼠應(yīng)激后興趣和快感明顯缺乏，活動減少，模型建立成功。雙向電泳圖譜分辨率高，重復(fù)性好。抑郁組平均蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為（1 609100 ±1510）點(diǎn)，正常組平均蛋白點(diǎn)數(shù)為（1615167 ±29178）點(diǎn)，匹配率72%。其中27個(gè)蛋白點(diǎn)在兩組間有顯著的量的改變，分子量集中在25~70 kD范圍內(nèi)。有差異的27個(gè)蛋白點(diǎn)經(jīng)質(zhì)譜鑒定和數(shù)據(jù)庫檢索，發(fā)現(xiàn)了7個(gè)蛋白質(zhì)。分別為鐵硫蛋白前體、三腺苷亞單位B、甲基丙二酸半醛脫氫酶、胰島素樣生長因子、海馬膽堿神經(jīng)刺激肽及兩種未知蛋白。結(jié)論抑郁癥發(fā)病機(jī)制可能與海馬神經(jīng)發(fā)生障礙和能量代謝障礙有關(guān)。差異蛋白點(diǎn)有可能成為抑郁癥的治療靶點(diǎn)
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