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瓊脂糖微球-重組耐堿蛋白A親和填料的產(chǎn)品特點

1 、產(chǎn)品介紹

 NuPerley rat-PA是一款抗體親和填料，其配基rat-PA為重組耐堿蛋白A（Recombinant Alkali-tolerant Protein A，rat-PA），NuPerley基球是新一代高剛性瓊脂糖微球。

重組耐堿蛋白A配基由大腸桿菌表達，不含動物來源，該配基通過多點偶聯(lián)的方式與基球偶聯(lián)，減少了配基掉落，通常情況下相對于抗體的配基掉落量可控制在5~10ppm以內(nèi)。加之基因工程改造，其對人IgG的動態(tài)結(jié)合載量穩(wěn)定在45mg/mL，可耐受0.1~0.5M濃度的NaOH溶液清洗和去除熱源。相較于ProANUPharoseFF，本產(chǎn)品保持了對人、小鼠、大鼠、兔、牛等等來源的多種類型和亞型的抗體有親和作用，可從腹水、血清、細胞培養(yǎng)上清或細胞抽提物中分離和純化多種哺乳動物不同亞型的抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白，可滿足不同規(guī)模的研究或生產(chǎn)嚴格的清潔要求。

2 、產(chǎn)品特點與技術(shù)指標

產(chǎn)品名稱    瓊脂糖微球-重組耐堿蛋白A親和填料

基質(zhì)    高剛性瓊脂糖微球

配基    重組耐堿蛋白A ， ≥10mg/mL

粒徑范圍 a    30~100 μm

平均粒徑    ~60 μm

動態(tài)結(jié)合載量 b    ≥45 mg h-IgG/mL

推薦工作流速 c    60~300 cm/h

最大流速與壓力 d    >1500 cm/h

使用 pH    3~10（推薦的工作 pH），3~12（短期穩(wěn)定）

化學穩(wěn)定性    在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、0.1~0.5 mol/L 氫氧 化鈉、6 mol/L 鹽酸胍、70%乙醇等。

儲存與運輸    20%乙醇，2~8 ℃保存，2~30 ℃運輸

注：a90%體積以上的微球在此粒徑范圍；bDBC10%測試條件為：10%流穿，6 min 停留時間；c 推 薦流速是指該流速可滿足大部分柱高下 2~6 min 停留時間的使用條件，并非只能在該流速范圍 內(nèi)工作；d 10 cm 柱高下的最大測試流速。

使用方法參考

 3.1  色譜柱裝填

以下闡述與層析系統(tǒng)連接時，填料的色譜柱裝填方法。

（1）所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。

（2）填料用量計算：通過沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積=柱體積×壓縮比（也稱壓縮因子）。沉降體積是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完全讀取的穩(wěn)定體積。NuPerley rat-PA的壓縮比為1.10。為使達到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速壓柱。

（3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應(yīng)體積，抽濾除去液體，并用約3倍填料體積的純化水洗滌，重復(fù)3次，以除去保存液。

（4）裝柱填料懸液準備：將填料轉(zhuǎn)移到適當?shù)娜萜髦?，加入適量的裝柱液，制成50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。

（5）裝填前準備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內(nèi)保留少量的蒸餾水，擰緊下堵頭，調(diào)整柱子使其垂直于地面。

（6）裝填：將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內(nèi)（必要時使用裝柱器），為避免引入氣泡，應(yīng)使之沿層析柱內(nèi)壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統(tǒng)連接。

（7）壓柱：使柱內(nèi)填料自然沉降（或 50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完全后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器，裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處；通過高流速（推薦流速見下表，注意柱壓不超過0.3MPa），繼續(xù)壓柱至界面清晰穩(wěn)定，標記界面穩(wěn)定時的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門/堵頭，關(guān)閉柱底的閥門/堵頭，下壓柱頭至標記位置下方與壓縮比對應(yīng)的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內(nèi)的填料。