C肽放免檢測(cè)，科研專用

C肽（C-Peptide）又稱連接肽，由胰島β細(xì)胞分泌，它與胰島素有一個(gè)共同的前體胰島素原。

[用途]及檢測(cè)意義 1) 指導(dǎo)胰島素治療，C 肽測(cè)定可以確定是否繼續(xù)使用胰島素治 療，還是用口服降糖藥或飲食治療。C 肽的測(cè)定值對(duì)糖尿病具有重要意義。 2) 對(duì)低血糖綜合癥的診斷。 3) 對(duì)胰島移植和胰腺移植的樣本，C 肽測(cè)定可以了解移植是否存活和 B 細(xì)胞的功能。 4) 同時(shí)測(cè)定 C 肽和胰島素可了解肝病的變化，如肝硬化時(shí)，外周血 C 肽/胰島素的比值下 降。

[試驗(yàn)原理] ，通過二抗沉淀抗原-抗體免疫復(fù)合物來測(cè)定血清中 C 肽的含量，待測(cè)血清、標(biāo)準(zhǔn)品中的 C 肽和 125I-C–P 與有*的抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。125I-C–P 一 部分與抗體結(jié)合為復(fù)合物，另一部分游離。加入分離試劑，離心使復(fù)合物部分沉淀，與游離 部分分離，棄去上清液，測(cè)定沉淀物的放射性計(jì)數(shù)。待測(cè)血清和標(biāo)準(zhǔn)中的 C 肽含量與與復(fù)合 物的放射性強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān)，用一系列不同濃度的 C 肽作標(biāo)準(zhǔn)，可獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線 上可查出血清中 C 肽的含量。

[注意事項(xiàng)] 1) 收到分析試劑盒后，盡快存放在 2 – 8℃。 2) 由于 C 肽在溶液狀態(tài)下極不穩(wěn)定，所以先溶解標(biāo)記物、抗體，待一切準(zhǔn)備工作完畢后， 后溶解標(biāo)準(zhǔn)品。如果分析試劑盒一次用不完，要做若干次，那么把標(biāo)準(zhǔn)品溶解后盡快 分裝成若干份，并立即存放在–20℃保存，避免反復(fù)凍融。C 肽標(biāo)記物的分裝、使用、 保存同標(biāo)準(zhǔn)品程序，避免反復(fù)凍融。 3) 在加分離試劑前，將分離試劑搖勻。 4) 分析試管放在 4℃溫育時(shí)，好套上塑料袋，避免蒸發(fā)，保持一定的反應(yīng)體積。

[實(shí)驗(yàn)方法] 1、 將實(shí)驗(yàn)所需試劑及樣本放置室溫，凍干品按操作要求進(jìn)行溶解,平衡至少 30 分鐘 以上才可進(jìn)行操作； 2、 取 60X12mm 聚苯乙烯管進(jìn)行編號(hào)，所有實(shí)驗(yàn)均做雙管重復(fù)； 3、 每個(gè) NSB 管加入 200µl 溫育液，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品“0”管 加入 100µl 溫育液； 4、 取每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品（A~F）、質(zhì)控血清和樣本 100µl 加入相應(yīng)編號(hào)的試管中； 5、 每管均各加入 100µl 標(biāo)記物工作液； 6、 除 T、NSB 管外，每管均各加入 100µl 抗體工作液，充分混勻； 7、 4℃溫育 24 小時(shí)； 8、 每管均各加入 500µl 分離劑后，充分混勻； 9、 室溫放置 15 分鐘后，離心 3500 轉(zhuǎn)／分，20 分鐘后，吸去或傾倒掉上清液； 10、 用 γ-計(jì)數(shù)器測(cè)定每管 1 分鐘的放射性強(qiáng)度計(jì)數(shù)； 11、 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。

[實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意] 1、 γ-計(jì)數(shù)器本底計(jì)數(shù)應(yīng)≤100CPM/分，效率應(yīng)≥75％； 2、 加入放射性標(biāo)記物時(shí)，應(yīng)做好防護(hù)、小心謹(jǐn)慎，以避免造成放射性污染； 3、 如果某一個(gè)樣本的測(cè)定值高于ZUI高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品濃度，用零標(biāo)準(zhǔn)品以 1：2 或 1： 4 的比例稀釋樣本后重新測(cè)試，測(cè)試結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

[質(zhì)量控制] 每次實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)至少采用兩個(gè)濃度的質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)量控制，以確保每次實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果 的可靠性。 1、 質(zhì)控血清的平均值應(yīng)在允許范圍內(nèi)； 2、 曲線方程應(yīng)采用佳擬合方式； 3、 重復(fù)樣本的測(cè)定結(jié)果相差在 15％以內(nèi)。 如不能同時(shí)滿足以上條件，則此次試驗(yàn)結(jié)果無效，全部試驗(yàn)需重新進(jìn)行。

C肽放免檢測(cè)，科研專用

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