常見免疫組化染色的兩種方法。南京信帆生物代做免疫組化實(shí)驗(yàn)，咨詢！
免疫組化雙染色法。
1.切片脫蠟至水。
2.0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
3.水洗。
4.抗原修復(fù)。
5.PBS洗3次，每次1分鐘。
6.加入非免疫性動(dòng)物血清，孵育10分鐘。
7.PBS洗3次，每次2分鐘。
8.加入*抗體孵育60分鐘。
9.PBS洗3次，每次2分鐘。
10.加入生物素化的第二抗體，孵育10分鐘。
11.PBS洗3次，每次2分鐘。
12.加入鏈卵蛋白素過氧化物酶孵育10分鐘。
13.PBS洗3次，每次2分鐘。
14.加入DAB-H2O2孵育5-10分鐘。
15.PBS洗3次，每次2分鐘。
16. 加入雙染增強(qiáng)液，孵育10分鐘。
17. 加入非免疫性動(dòng)物血清孵育10分鐘。
18. PBS洗3次，每次2分鐘。
19. 加入選用的第二種抗體孵育60分鐘。
20. PBS洗3次，每次2分鐘。
21. 加入生物素標(biāo)記的第二抗體孵育10分鐘。
22. PBS洗3次，每次2 分鐘。
23. 加入鏈卵蛋白素堿性酶孵育10分鐘。
24. PBS洗3次，每次2分鐘。
25. 加入AEC溶液，孵育5-10分鐘。
26. 自來水洗。
27. 蘇木素染核5-10分鐘。
28. 水性封片。
注：1.*種復(fù)合物也可先用鏈卵蛋白素堿性酶。
2.第1次顯色也可用BCIP/NBT溶液，顏色為藍(lán)黑色，但應(yīng)與蘇木素鑒別。
免疫組化的雙染色法(ⅱ) (Immuno-histochemistry double staining method)
1.切片脫蠟至水。
2.0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
3.水洗。
4.抗原修復(fù)。
5.PBS洗3次，每次1分鐘。
6.加入選用的*抗體孵育30-60分鐘。
7.PBS洗3次，每次2分鐘。
8.加入增強(qiáng)劑孵育20-30分鐘。
9.PBS洗3次，每次2分鐘。
10.加入酶標(biāo)抗兔/鼠，復(fù)合物，孵育
11.PBS洗3次，每次2分鐘。
12.加入DAB-H2O2孵育5-10分鐘
13.PBS洗3次，每次2分鐘。
14.加入選用的第二種抗體孵育60分鐘。
15.PBS洗3次，每次2分鐘。
16. 加入增強(qiáng)劑孵育20-30分鐘。
17. PBS洗3次，每次2分鐘。
18. 加入酶標(biāo)抗兔/鼠堿性酶復(fù)合物孵育20-30分鐘。
19.PBS洗3次，每次2分鐘。
20.加入AEC溶液孵育5-10分鐘。
21.自來水洗。
22.蘇木素染核5-10分鐘。
23.水性封片。
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